4. ВЛИЯНИЕ ЭФФЕКТОРОВ  НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИТОРОВ

 

Влияние солей металлов на определение пестицидов. При определении остаточных количеств пестицидов в реальных объектах окружающей среды необходимо учитывать возможное влияние ионов металлов. С этой целью нами были изучено действие солей тяжелых металлов, являющихся обратимыми ингибиторами БуХЭ (табл.7). При совместном присутствии ионов металлов и пестицидов необратимое ингибирующее действие последних снижается в силу "защитного эффекта", который зависит от природы металла, условий определения и частично подавляется стабилизатором, в наибольшей степени N-фталилхитазаном (табл.8).

Определение комбинированных ингибиторов. Азотсодержащие фосфорорганические соединения способны в зависимости от строения проявлять и обратимое, и необратимое ингибирующее действие за счет наличия аминогруппы и фосфорорганического фрагмента. Нами изучены два класса таких соединений - гидразониевые соли диалкилдитиофосфатов и a-аминофосфонаты (табл.2, табл.3). Как оказалось, изученные соединения соединения либо не проявляют ингибирующего действия (А-3 - А-8, Б-20), либо демонстрируют лишь слабое обратимое ингибирующее действие (А-1, А-2 - ПО 2Ч10-5 моль/л, a-аминофосфонаты - ПО (1-4)Ч10-5 моль/л.). Можно предположить, что низкая активность изученных соединений обусловлена взаимным связыванием (ионного характера или за счет водородных связей) азот- и фосфорсодержащих фрагментов молекулы. Электрохимическая "активация" ингибиторов значительно повысила чувствительность их определения, причем и гидразоны, и фосфонаты стали демонстрировать необратимое ингибирующее действие на ферменты (табл.9-11). Для гидразониевых солей ингибирование определяется строением фосфатного аниона. Для a-аминофосфонатов наибольшее влияние на ингибирующее действие оказывают радикалы при атоме фосфора, непосредственно соседствующие с аминогруппой. При использовании КЭ ингибирующее  действие  всех  указанных  соединений усиливается в  кислой среде с максимумом при рН 3.5-4.0. Достигнутые в этих рабочих условиях пределы обнаружения более чем на порядок ниже полученных при использовании БуХЭ.

Вероятно, протонирование аминогруппы высвобождает фосфорильный ингибиторный центр. Кроме того, КЭ малочувствительна к действию ионных эффекторов, поэтому в отличие от БуХЭ не проявляется "защитный эффект" гидразониевого и аммонийного катионов. 

Фосфорилированные каликсарены Б-15 - Б-19 демонстрируют практически совпадающие градуировочные графики, поэтому, возможно, их ингибирующее действие связано с процессами связывания субстрата в комплексы "гость-хозяин". В отношении щелочной фосфатазы  фосфорилированные каликсарены демонстрируют слабое активирующее (5Ч10-7-2.2Ч10-6 моль/л)  и ингибирующее (2.5Ч10-6 - 4Ч10-6 моль/л) действие.

Достигнутые пределы обнаружения позволяет применять ферментные тесты для контроля процессов с участием мембранных переносчиков, в технологическом контроле синтеза фосфорорганических комплексонов, в оценке чистоты антипиренов и фармацевтических препаратов.

Оценка общей загрязненности осадков сточных вод тяжелыми металлами. Присутствие подвижных форм тяжелых металлов ограничивает возможности утилизации осадков сточных вод в агропроизводстве. Нами изучена возможность оценки общей загрязненности осадков по их ингибирующему действию на БуХЭ. Как выяснилось при моделировании загрязнения осадков известными количествами солей металлов, последующая кислотная и солевая вытяжки  не  позволяют  полностью  извлечь  вносимое количество солей. По сравнению с водными растворами  солей металлов снижается чувствительность определения, в 2-10 раз увеличивается нижняя граница определяемых содержаний, причем снижение чувствительности наиболее значительно для осадков с небольшим сроком хранения, богатых органическими соединениями, способными удерживать металлы в нетоксичных комплексах. Наблюдаемое в некоторых случаях активирующее действие водных вытяжек связано, вероятно, с соэкстракцией компонентов поглощающего комплекса и изменения буферных свойств рабочего раствора. Ацетоновые вытяжки из этих осадков проявляют обратимое ингибирующее действие, подавляемое электрохимической обработкой.

 

| Определение пестицидов | В начало | Выводы |