2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

 

В работе были использованы  препараты ферментов бутирилхолинэстеразы из сыворотки крови лошади (БуХЭ, АО"Биомед", Пермь), микробиальной карбоксилэстеразы (КЭ, АО"Биотехнология", Москва) и щелочной фосфатазы, стабилизированные путем включения в водорастворимые полимерные пленки на основе N-фталилхитазана, b-декстрана и полиглюкина. Скорость ферментативной реакции измеряли по времени достижения 30-50% превращения хромогенного субстрата (времени перехода окраски) с помощью колориметрического анализатора АКИ-Ц-01. Оценка чувствительности тестов к ингибиторам производилась по модельным водным растворам и экстрактам из растительного материала и почв, содержащим различные ингибиторы - фосфорорганические пестициды (табл.1), фториды, соли тяжелых металлов, гидразониевые соли диалкилдитиофосфатов (табл.2) и a-аминофосфонаты (табл.3). 

Включение ферментов в пленки водорастворимых полимеров значительно повышает их устойчивость при хранении. Ферментативная активность остается практически постоянной в течение полугода при использовании полиглюкина и декстрана и более года для фталилхитозана  (рис.1). В качестве субстратов использовали бутирилхолин иодид (БХИ), индофенилацетат (ИФА) для БуХЭ, ИФА и фенилацетат (ФА) - для КЭ. Присутствие стабилизатора не влияет на скорость ферментативного гидролиза субстрата. С увеличением буферной емкости время перехода окраски увеличивается, а ошибка его измерения уменьшается. 

 

| Общая характеристика работы | В начало | Определение фосфорорганических пестицидов  |